本试剂盒是利用拓扑异构酶（Topoisomerase）高效快速连接DNA片段的原理进一步研发而成，与传统的T4连接酶相比，具有以下优势：1）快速，仅需1-5分钟即可完成连接反应。2）高效，无自连现象，阳性克隆率接近100%，无需设置蓝白斑筛选；3）操作简单，从连接到涂板仅需15-20 min。操作过程省去冰浴、热激和1 h复苏等。4）可连接长达5 kb目的产物。
- 快速、高效、操作简单
-25~-15℃保存，有效期1年。
Q：可以连接大于 5kb 的片段吗？
A：大于 5kb 的没有测试过，可能比较难。
Q：反应过夜可以吗？
A：不可以，TOPO 异构酶具有限制性内切酶活性，时间过长会重新切割重组质粒，建议反应时间不超过 5min。
Q：Takara 的T 载体和我们TOPO 克隆试剂盒有什么区别？可以替代吗？
A：可以替代。区别：原理不一样，Takara 试剂盒利用的是 T4 连接酶，我们是 TOPO 异构酶，TOPO 异构酶更快更高效。
Q ：10909-Blunt Cloning Kit 和 10907- 零背景 TOPO-TA 克隆试剂盒中的 10 × Enhancer 是否一样吗？
A：是一样的，可以替换。
Q：自杀基因CCDB 和CCCTT 序列是什么？
A：1）自杀基因 CCDB 是指无片段插入该基因中时，该基因会表达蛋白杀死细菌，使克隆无法生长，CCDB 基因的序列是保密的。
2）CCCTT 序列是指拓扑异构酶能够偶联的序列。
[1] Tao R, Wang Y, Jiao Y, et al. Bi-PE: bi-directional priming improves CRISPR/Cas9 prime editing in mammalian cells [published online ahead of print, 2022 Jun 10]. Nucleic Acids Res. 2022;50(11):6423-6434. doi:10.1093/nar/gkac506(IF:19.160)
[2] Tao R, Wang Y, Hu Y, et al. WT-PE: Prime editing with nuclease wild-type Cas9 enables versatile large-scale genome editing. Signal Transduct Target Ther. 2022;7(1):108. Published 2022 Apr 20. doi:10.1038/s41392-022-00936-w(IF:18.187)
[3] Yang S, Wang N, Kimani S, et al. Characterization of Terpene synthase variation in flowers of wild aquilegia species from Northeastern Asia [published online ahead of print, 2022 Jan 18]. Hortic Res. 2022;9:uhab020. doi:10.1093/hr/uhab020(IF:6.793)
[4] Yu P, Zhou L, Yang WT, et al. Comparative mitogenome analyses uncover mitogenome features and phylogenetic implications of the subfamily Cobitinae. BMC Genomics. 2021;22(1):50. Published 2021 Jan 14. doi:10.1186/s12864-020-07360-w(IF:3.969)
[5] Liu G, Liu Y, Niu B, et al. Genetic mutation of TRPV2 induces anxiety by decreasing GABA-B R2 expression in hippocampus. Biochem Biophys Res Commun. 2022;620:135-142. doi:10.1016/j.bbrc.2022.06.079(IF:3.575)
[6] Li GY, Liu XJ, Fang GQ, Yang J, Zhan S, Li MW. Functional characterization of a low-density lipoprotein receptor in the lepidopteran model, Bombyx mori [published online ahead of print, 2022 Apr 11]. Insect Sci. 2022;10.1111/1744-7917.13018. doi:10.1111/1744-7917.13018(IF:3.262)
相关产品
