本品是采用大肠杆菌TOP10菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化,转化效率可达108 cfu/μg DNA以上,广泛适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。可用于构建克隆,蓝白斑筛选等,具有链霉素(StrR )抗性。
TOP10感受态细胞基因型:F-mcrA △(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZ△M15 △lacX74 recA1 ara△139 △(ara-leu) 7697 galU galK rpsL (StrR ) endA1 nupG
- 适用广泛:可用于克隆哺乳动物基因组 (甲基化) 和植物 DNA、文库构建或任何常规分子克隆应用
干冰运输;-80℃保存,有效期6个月。请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。
Q:pUC19 (control vector, 10 pg/μL)是什么抗性?
A:氨苄抗性的。
Q:11801 和 11802 有什么区别?
A:11802 稳定一些,比较常用。
Q:最大可以转化多大的质粒? 约 20kb 可以吗?
A:转化质粒的大小与菌株有关, DH5α和 Top10 感受态细胞适合小于 15kb 的质粒。
Q:菌体大片长,无单个菌落,是什么原因?
A:先用感受态细胞转到含抗生素的培养基中,如果不长,说明抗生素没有失效。在排除抗生素是否失效的原因后,检查转化步骤,在转化操作时,请勿将菌体全部涂布于平板上。因为大量菌体的存在抑制正常转化子的生长。改正的方法有两种:一是省去 37℃ 复苏培养的步骤,这样不但节省了时间,而且也不出现云雾了;二是 37℃复苏后只吸取 50-100 µL 菌液涂布即可。
Q:涂布 Amp+板后,总是有很多卫星菌落,单菌落长不大。
A:Amp 抗性板铺板密度过高或培养时间过长都会导致出现对 Amp 敏感的卫星菌落, 因此涂布 Amp 抗性板时菌密度应适当降低,同时 37℃培养时间不超过 20 h。另外推荐选择培养基中使用羧苄青霉素代替氨苄青霉素(Amp),并将抗生素浓度提高到 100µg/mL,可使情况改善。