Hieff Clone® Universal II One Step Cloning Kit是新一代的同源重组克隆试剂盒，精心优化的第二代2× Hieff Clone® Universal II Enzyme Premix预混了重组酶和重组反应所需缓冲液，并添加了独特的重组增强因子，可显著提高重组克隆效率。

该试剂盒可以将PCR产物定向克隆至任何载体的任何位点，兼容未纯化PCR产物、直接回收的PCR产物、低浓度的胶回收产物，本产品可重组同源臂GC含量30%-70%的接头片段。将载体完全线性化，并在插入片段正、反向PCR引物5’端引入15-25 bp的线性化载体末端同源序列，使得插入片段PCR产物5’和3’末端分别带有与线性化载体两末端对应的完全一致的序列。PCR产物和线性化载体在重组酶的作用下，在50℃条件下最快仅需5 min即可完成重组反应。克隆阳性率可达95%以上。

• 定向：可满足1-7个DNA片段的定向无缝拼接；
• 简便：片段无需酶切，多片段连接一管内即可完成；
• 快速：最快5分钟即可完成连接反应；
• 高效：克隆生长数多，克隆阳性率可达95%以上；
• 广泛：适用于任何载体，兼顾粘性和平末端；可用于多片段、点突变等的克隆；
• 超长：载体片段连接长度可达25 kb以上。

• 单片段6 μL小体系高效重组

图1. 在6 μL小体系非复苏感受态下，连接10 ng低投入量单片段。结果显示，10923ES性能好于竞品，连接效率高，菌落数多，阳性率达100%。A-B：重组转化平板。载体（10 kb）和插入片段（1 kb）摩尔比为1:2。C：插入片段PCR鉴定电泳图，M：Yeasen 10505ES。

• 多片段高效重组

两片段（3 kb）连接。结果显示，10923ES菌落数多，阳性率100%。A：重组转化平板。载体（11.6 kb）和插入片段（3 kb）摩尔比为1:2。B：插入片段PCR鉴定电泳图，M：Yeasen 10505ES。

三片段（4.4 kb）连接。结果显示，10923ES菌落数多，阳性率100%。A：重组转化平板。载体（11.6 kb）和插入片段（4.4 kb）摩尔比为1:2。B：插入片段PCR鉴定电泳图，M：Yeasen 10505ES，菌落PCR长度2.6 kb。

六片段（7.6 kb）连接。结果显示，10923ES产品性能好于竞品，菌落数多，阳性率100%。A-B：重组转化平板。载体（11.6 kb）和插入片段（7.6 kb）摩尔比为1:2。C：插入片段PCR鉴定电泳图，M：Yeasen 10505ES，菌P长度2.6 kb。

• 25 kb以上超长片段轻松高效重组

超长片段连接。结果显示，10923ES菌落数多，阳性率100%。A：重组转化平板。载体（21 kb）和插入片段（4.5 kb）摩尔比为1:2。B：插入片段PCR鉴定电泳图，M：Yeasen 10505ES。

• 低浓度多片段高效重组

分别连接低浓度的五片段和六片段。结果显示，10923ES在低浓度下连接性能稳定，菌落数多，阳性率100%。A-B：重组转化平板。载体（11.6 kb）和插入片段（5片段共5.6 kb、六片段共7.6 kb）摩尔比为1:2。C-D：插入片段PCR鉴定电泳图，M：Yeasen 10505ES，菌P长度2.6 kb。

• 试剂盒稳定性好

在37℃条件下放置7天，结果显示，10923ES在低浓度下依旧稳定连接五片段和六片段。A-F：重组转化平板。载体（11.6 kb）和插入片段（5片段共5.6 kb、六片段共7.6 kb）摩尔比为1:2。G-H：插入片段PCR鉴定电泳图，M：Yeasen 10505ES，菌P长度2.6 kb。

组分A、B、C：-25~-15℃保存，有效期1年。

组分D：室温保存，有效期2年。