2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix (With Dye)是即用型2× 预混合溶液,包含Hieff Canace® AdvanceFast High-Fidelity DNA Polymerase,dNTPs以及优化的缓冲体系,预混液中含有预先添加的电泳指示剂,PCR产物可直接进行电泳,扩增产物为平末端。2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix (With Dye)具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,反应体系只需加入引物和模板即可。另外,该产品还含有特异保护剂,使得预混液反复冻融后仍可维持稳定活性。
- 高保真:低错配率,高GC易突变序列中碱基错配比231/300000
- 扩增速度快:延伸速度快至5 sec/kb
- 适用性广:可覆盖20-80%GC含量的基因,耐受小鼠裂解物和20%的血液
- 稳定性好:37℃下存放7d,不影响产品性能
- 快速简便:只需加入引物和模板即可进行扩增,带有上样染料,可直接电泳
- 保真度高,错配率低
图1.以不同物种基因组为模板,选取6段GC rich、极易发生碱基突变/丢失的片段进行扩增,将各自PCR产物克隆至载体,并对每种序列挑取100个单克隆进行测序以确认碱基序列错配/突变情况。结果显示10164ES发生碱基错配/突变的比例优于国内外品牌试剂。
- 10kb以内片段扩增延伸时间可达5 sec/kb
图2. 使用10164ES和不同产品均以5 sec/kb的延伸速度从100 ng人基因组模板扩增不同长度片段(0.4-10 kb),延伸时间均要求为5 sec/kb。结果显示,10164ES在10kb以内的片段均可以5 sec/kb的延伸速度扩增。Marker: Yeasen 10510ES。
- 可扩增不同GC含量的基因片段
图3. 使用10164ES从人gDNA模板中扩增23-76% GC含量片段,延伸时间设置5 sec/kb。结果显示,产品扩增特异性良好,能兼容不同GC含量片段扩增。Marker: Yeasen 10510ES。
- 可兼容不同类型的模板
图4.使用10164ES从不同样本中扩增不同长度片段,延伸时间设置5-10 sec/kb。结果显示本产品扩增特异性良好,能兼容不同模板的不同片段扩增。1.小鼠gDNA 1 kb;2.小鼠gDNA 2 kb;3.小鼠gDNA 6 kb;4.玉米gDNA 1 kb;5.水稻gDNA 2 kb-A;6.水稻gDNA 2 kb-B; 7.人293细胞cDNA 1 kb;8.人293细胞cDNA 2 kb ;9.人293细胞cDNA 3 kb;10.人293细胞cDNA 12 kb;11.大肠杆菌菌液8 kb;12.大肠杆菌菌液16 kb;13.水稻gDNA 10 kb-A;14.水稻gDNA 10 kb-B;15.水稻gDNA 10 kb-C;16.水稻gDNA 20 kb-A;17.水稻gDNA 20 kb-B;18.人血液直扩3 kb。Marker: Yeasen 10510ES。
- 不同物种模板扩增检出率高
图7. 用10164ES分别对拟南芥、油菜、马铃薯0.5-10 kb 不同GC含量的片段进行扩增,延伸时间5 sec/kb,结果显示10164ES可保证扩增。Marker: Yeasen 10510ES。
图8. 用10164ES分别对拟南芥、油菜、果蝇、秀丽线虫和斑马鱼中随机序列(序列随机拉取),0.5-10kb覆盖20-80%GC含量的片段进行扩增,延伸时间5 sec/kb,结果显示10164ES有着不错的检出率。
- 较强的耐受性
图9. 用10164ES对血液和小鼠裂解物不同大小片段进行扩增,结果显示10164ES可以耐受1-20%的血液,对小鼠裂解物也有一定的耐抑制性。M:Yeasen 10510ES。
-25~-15℃保存,有效期1年。
Q:10163ES和10164ES的区别是什么?
A:10164ES是预混上样染料的一款试剂,用户不必在上样电泳的时候,购买上样染料、花时间一个孔一个孔的加染料;b.10163ES是无色版本,不含染料,针对用户后续酶切等实验不会造成干扰,保证后续的高效酶切。
Q:10163ES和10164ES的扩增产物是否带A尾?
A:不带A尾。产物为平末端产物,可用于后续做同源重组克隆(10911\10922ES)或是TOPO平末端克隆(10906\10909ES)。如果后面要进行TA克隆,用户则需要另外单独购买dATP(10118ES)和常规的Taq酶(10101ES)。