外泌体蛋白专用裂解液是上海宇玫博生物科技有限公司专门针对外泌体样本研发的裂解试剂,可高效裂解外泌体蛋白,该裂解液已添加蛋白酶抑制剂,可有效抑制蛋白降解。使用时与外泌体样本1:1混匀即可,裂解后的蛋白样品可用于BCA、Western Blot 等实验。本试剂含有较高浓度的去垢剂,不适用于Bradford法测定蛋白浓度。
本产品的主要成分为Tris (pH7.4), NaCl, Triton X-100, sodium deoxycholate, SDS, EDTA, PMSF, Protease Inhibitor Cocktail(AEBSF, Aprotinin, Bestatin, E-64, Leupeptin, Pepstatin A)等。
使用说明
1.实验准备:实验前先将裂解液2~8 ℃融化混匀后置于冰上;
2.将外泌体样本与裂解液按体积比1:1混匀后置于冰上裂解10 min;
3.于4 ℃以11,200×g(~12,000 rpm*)离心5 min取上清,用BCA法测定蛋白浓度及进行Western Blot等后续实验;
*为约7 cm有效离心半径的小离心机换算(≤2 mL离心管)。
注意事项
1.本产品含有蛋白酶抑制剂,避免反复冻融,建议分装冻存;
2.裂解样品的所有步骤都需在冰上或4 ℃条件下进行;
3.裂解后蛋白浓度应小于2 μg/μL,以保证裂解充分;
4.本产品仅用于生命科学研究,不得用于医学诊断及其它用途;
5.为了您的安全健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
实验说明:
同一外泌体样本通过不同试剂进行裂解,定量后进行Western blit检测。
实验条件:
SDS-PAGE胶:10%分离胶
样品上样量:10 μg
一抗:CD63 antibody,1:2000稀释,4 ℃赋予过夜
二抗:mouse IgG,1:10000稀释,室温孵育50 min
曝光时间:5 s
冰袋运输,-20 ℃存储,有效期1年。