Exosome(外泌体)是由活细胞分泌的直径约为30-150nm的小囊泡,具有典型的脂质双分子层结构;存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中;Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息,不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用,更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。
本试剂盒采用独特的分离技术,可以快速从血清/血浆中获得大量完整的外泌体颗粒,适用于下游的细胞共培养、电镜分析、WesternBlot、荧光定量(qPCR)和高通量测序等应用。可以提取2 mL/30 mL血清/血浆。
组分信息
组分编号 | 组分名称 | 41206ES02 | 41206ES30 |
41206-A | Blood PureExo Solution(BPS)* | 1.2 mL | 18 mL |
41206-B | Exosome Purification Filter* | 2 Tubes | 30 Tubes |
* Nuclease-free, Sterile
/
使用说明
1. 样本预处理
1) 取样:收集新鲜的样品,置于冰上待用;若为冻存的样品,可于冰箱取出后放于25℃水浴中解冻,待完全融化后置于冰上待用;
2) 样品初始用量:单次提取时的样品量建议血清、血浆不低于200 μL;
3) 离心去细胞碎片:将样品转移至离心管中,于4℃以3,000×g离心10 min,去除样品中的细胞碎片(若沉淀较多,可3,000×g, 10 min离心多次至无明显沉淀,每次取离心上清液);
4) 离心去杂质碎片:将离心上清液转移至新的离心管中,于4℃以12,000×g离心10 min, 去除样品中的杂质碎片;
5) 上清液转移:去除杂质碎片的上清液转移到新离心管中。
2. 外泌体提取
1) 上清液预处理:在去除杂质的离心上清液中先加入预冷的1×PBS进行稀释,再加入41206-A试剂,具体的加入量如下(其他样品量根据表中试剂用量进行等比例变换):
样品名称 | 样品量 | PBS用量 | 41206-A 用量 |
血清 | 0.25 mL | 0.75 mL | 0.25 mL |
血浆 | 0.25 mL | 0.75 mL | 0.25 mL |
2) 溶液混合:加入41206-A试剂后将离心管盖紧,通过涡旋振荡器混匀1min,再放置4℃静置30 min以上(注:增加静置时间可提高外泌体得率,但不可超过24h);
3) 沉淀外泌体:取出装有混合液的离心管于4℃以12,000×g离心15 min,弃上清,沉淀中富含外泌体颗粒(注:尽可能吸尽上清液);
4) 再次离心:将含有沉淀的离心管再次于4℃以12,000×g离心2 min,弃上清(注:尽可能吸尽上清液);
5) 外泌体重悬:取合适量的1×PBS均匀吹打离心沉淀物,待其溶解后,将重悬液转移至新的1.5 mL离心管中(建议每0.25 mL血清血浆上清用200 μL左右1×PBS重悬);
6) 收获外泌体颗粒:将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃以12,000×g离心2 min,保留上清液,其中富含外泌体颗粒(若沉淀较多,可12,000×g, 2 min离心多次至无明显沉淀,每次取离心上清液);
3. 外泌体纯化
1) 纯化外泌体:将收获的外泌体颗粒粗品转入41205-B(EPF柱)上室中,于4℃以3,000×g离心10 min,离心后收集EPF柱管底的液体,此液体即为纯化后的外泌体颗粒(注:EPF柱不可重复使用);
2) 外泌体的保存:纯化后的外泌体以合适体积进行分装冻存于-80℃低温冰箱中,以备后续实验使用。
注意事项
1) 使用前请将外泌体抽提试剂(41206-A)充分混匀;
2) 产品只针对血清/血浆样本,不适用其它体液或者是细胞培养上清中外泌体的抽提;如果需要进行细胞上清外泌体分离,请选用细胞培养上清外泌体快速抽提试剂盒;
3) 如果想要进一步纯化外泌体,可以使用相应抗体包被的磁珠进行亲和纯化;
4) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;
5) 本产品仅作科研用途!
室温运输,室温保存,有效期2年。
Q: 41216和41206有什么区别?
A: 41206是旧版,41216是新版。新版多加了除杂蛋白的试剂solution P2,除杂蛋白的效果会好很多。结果上来说,同样的样品新版提取的蛋白浓度会低一些,但是纯度会高一些。老客户一直在用41206就继续推荐41206,新客户推荐41216。两款试剂盒都是共沉淀法,做蛋白质组学推荐41216新款试剂盒。新款试剂盒对杂蛋白的效果更好,对下游实验的影响也小。
Q: 外泌体纯化柱有纯化的作用吗?
A: 纯化柱是220nm过滤柱,有去除大颗粒杂质的功能。