Exosome（外泌体）是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中；Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。
本试剂盒采用独特的分离技术，可以快速从细胞培养上清中获得大量完整的外泌体颗粒，适用于下游的细胞共培养、电镜分析、Western Blot、荧光定量（qPCR）和高通量测序等应用。
组分信息
* Nuclease-free, Sterile
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使用说明
1. 样本预处理
1) 取样：收集新鲜的样品，置于冰上待用；若为冻存的样品，可于冰箱取出后放于25℃水浴中解冻，待完全融化后置于冰上待用；
2) 样品初始用量：单次提取时的样品量建议细胞上清液不低于20 mL；
3) 离心去细胞碎片：将样品转移至离心管中，于4℃以3,000×g离心10 min，去除样品中的细胞碎片(若沉淀较多，可3,000×g, 10 min离心多次至无明显沉淀，每次取离心上清液)；
4) 离心去杂质碎片：将离心上清液转移至新的离心管中，于4℃以10,000×g离心10 min, 去除样品中的杂质碎片；
5) 上清液转移：去除杂质碎片的上清液转移到新离心管中。
2. 外泌体提取
1) 上清液预处理：在去除杂质的离心上清液中加入41205-A试剂，具体的加入量如下(其他样品量根据表中试剂用量进行等比例变换):
1) 溶液混合：加入41205-A试剂后将离心管盖紧，通过涡旋振荡器混匀1min，再放置4℃静置8h以上(注：增加静置时间可提高外泌体得率，但不可超过24h)；
2) 沉淀外泌体：取出装有混合液的离心管于4℃以10,000×g离心60 min，弃上清(注：尽可能吸尽上清液)；
3) 再次离心：将含有沉淀的离心管再次于4℃以10,000×g离心2 min，弃上清(注：尽可能吸尽上清液)；
4) 外泌体重悬：取合适量的1×PBS均匀吹打离心沉淀物，待其溶解后，将重悬液转移至新的1.5 mL离心管中(建议每20 mL细胞培养上清用200 μL左右1×PBS重悬)；
1) 收获外泌体颗粒：将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃以12,000×g离心2 min，保留上清液，其中富含外泌体颗粒(若沉淀较多，可12,000×g, 2 min离心多次至无明显沉淀，每次取离心上清液)；
3. 外泌体纯化
1) 纯化外泌体：将收获的外泌体颗粒粗品转入41205-B(EPF柱)上室中，于4℃以3,000×g离心10 min，离心后收集EPF柱管底的液体，此液体即为纯化后的外泌体颗粒(注：EPF柱不可重复使用)；
2) 外泌体的保存：纯化后的外泌体以合适体积进行分装冻存于-80℃低温冰箱中，以备后续实验使用。
注意事项
1) 为了确保获得的外泌体是来自于您的细胞，最好使用无外泌体的血清进行培养；
2) 如果想要进一步纯化外泌体，可以使用相应抗体包被的磁珠进行亲和纯化；
3) 产品只针对细胞培养上清来源的外泌体分离，不适用血清/血浆中外泌体的抽提，如果需要进行血清/血浆的外泌体分离，请选用血清/血浆外泌体快速抽提试剂盒；
4) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；
5) 本产品仅作科研用途！
室温运输，室温保存，有效期2年。
Q: 外泌体纯化柱有纯化的作用吗？
A: 纯化柱是220nm过滤柱，有去除大颗粒杂质的功能。
Q7:客户外泌体染色之后，是否可以用我们的细胞上清外泌体抽提试剂盒再次提取？对提取的外泌体有没有上限？添加是否也是按照体积比进行添加抽提试剂？
A: 可以的，对重新提取的外泌体没有上限要求，等比例添加就好。也推荐超滤管的方式。
Q: 沉淀法应该是不会对已经染色的外泌体有影响吧？
A: 沉淀法对染色的外泌体没什么影响。
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