2×Hieff® Robust PCR Master Mix (With Dye)选用改造的Taq DNA Polymerase,添加强力延伸因子、扩增增强因子以及优化的缓冲体系,扩增速度和扩增产量较普通PCR Mix有了质的飞跃。扩增速度可达15 sec/kb,适用于快速PCR反应,1 kb以内的极限扩增速度可达5 sec/kb,大幅节省PCR反应时间。预混液中含有dNTP、Mg2+,使用时只需加入引物和模板即可进行扩增,大大简化实验的操作步骤。Mix中含有电泳指示染料,可在反应结束后直接进行电泳,使用方便。体系中加入的保护剂使得Master Mix经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。PCR产物的3’端带A,可轻松克隆至T载体。
- 扩增速度达15-30 s/kb,极限速度5 s/kb
- 扩增长度1-4 kb
- 模板适用性广
- 靶基因GC耐受范围35-70%
- 延伸速度30s/kb,极限延伸速度5s/kb
以小鼠基因组为模板,不同延伸速度(5 s/kb-60 s/kb)扩增2 kb大小的片段。PCR结束后取4 μL进行电泳检测。a为Hieff® Robust PCR Mix,b-d为其他品牌普通型PCR Mix,e为快速型PCR Mix。Marker:1 kb DNA ladder。
- 扩增长度4kb,扩增时间更短
以小鼠基因组为模板,分别扩增1-4 kb的目的片段,PCR反应条件使用各公司推荐的PCR反应条件,PCR反应结束后,取4 μL进行电泳检测。Marker:1 kb DNA ladder。
- 适用于动植物基因组及菌落PCR实验
以人基因组DNA(1)、拟南芥基因组DNA(2)、水稻基因组DNA(3)、小鼠基因组DNA(4)、菌液(5)、质粒DNA(6)为模板,30s/kb延伸速度条件下分别扩增大小为0.5 kb、1 kb、2 kb、4 kb的片段,PCR结束后取4uL进行电泳检测。Marker:1kb DNA ladder。
-25~-15℃保存,有效期2年。
Q:产品保质期、运输问题
A:冰袋运输。-20℃,保质期2年。
Q:该产品扩增的PCR产物可用于PAGE胶电泳吗?
A:不可以。
Q:该产品可以用于扩增鼠尾、植物裂解液等粗制模板吗?
A:推荐10108 Hieff® HotStart PCR Genotyping Master Mix(With Dye) 用于粗制模板的扩增。
Q:出现非特异性扩增的解决方案?
A:理论上,采用该产品的建议扩增条件,可以解决大部分基因扩增。当出现非特异性扩增时,可尝试将退火温度梯度上升2℃解决。
[1] Huang H, Zhang W, Cai W, et al. VEXAS syndrome in myelodysplastic syndrome with autoimmune disorder. Exp Hematol Oncol. 2021;10(1):23. Published 2021 Mar 19. doi:10.1186/s40164-021-00217-2(IF:5.133)
[2] Cao J, Fan T, Li Y, et al. Phage-Display Based Discovery and Characterization of Peptide Ligands against WDR5. Molecules. 2021;26(5):1225. Published 2021 Feb 25. doi:10.3390/molecules26051225(IF:4.412)
[3] Xie B, Li L, Zhang Z, et al. MicroRNA-1246 by Targeting AXIN2 and GSK-3β Overcomes Drug Resistance and Induces Apoptosis in Chemo-resistant Leukemia Cells. J Cancer. 2021;12(14):4196-4208. Published 2021 May 13. doi:10.7150/jca.58522(IF:4.207)
[4] Ni P, Wang G, Wang Y, et al. Correlation of MIF-AS1 polymorphisms with the risk and prognosis of gastric cancer. Pathol Res Pract. 2022;233:153850. doi:10.1016/j.prp.2022.153850(IF:3.250)