HisSep Ni-NTA Agarose Resin 6FF以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法偶联四配位的氮川三乙酸（NTA）为配体，螯合镍离子（Ni2+）后，形成非常稳定的八面体结构，镍离子处于八面体的中心，这样的结构可保护镍离子免受小分子的进攻，更加稳定，可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件。此外，因其基质的耐压性（该基质可以耐受最高0.3 MPa的压力），该产品可以用于工业大规模蛋白的纯化，可在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化。
HisSep Ni-NTA 6FF Chromatography Column是一种以HisSep Ni-NTA Agarose Resin 6FF为填料的中压预装柱，该预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA等，方便客户用于纯化His-tag蛋白。
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基质（Matrix） |
高度交联的6%琼脂糖凝胶 |
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粒径（Bead size） |
45-165 µm |
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载量（Capacity） |
＞40 mg 6×His-tagged protein/mL 基质 |
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耐压（Tolerance Pressuremax） |
0.3 Mpa，3 bar |
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储存缓冲液（Buffer） |
含20%乙醇的1×PBS |
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柱子尺寸（Column Size） |
0.7×2.5 cm（1mL） |
冰袋运输。4℃保存。有效期2年。
Q：为什么柱子反压过高？
A：可能是样品中含高浓度的核酸，建议延长破碎时间直至粘度降低，或添加DNaseI
（终浓度为 5µg/ml），Mg2+(终浓度 1mM)，冰上孵育 10-15min。
Q：为什么洗脱组分中无目的蛋白？
A：可能是表达量太低，建议优化表达条件，使用包涵体纯化缓冲体系。
Q：为什么上样过程中蛋白发生沉淀？
A：若蛋白发生聚集，建议在样品和所有缓冲液中添加稳定剂，如 0.1%Triton X-100 或 Tween-20。
Q：上样量一般是多少？
A： 具体上样量要根据填料的使用时间和载量， 该产品的载量为＞ 40 mg 6 × His-tagged protein/mL 基质。
[1]Guo Z, Long L, Ding S. Characterization of a d-lyxose isomerase from Bacillus velezensis and its application for the production of d-mannose and l-ribose[J]. AMB Express, 2019, 9(1): 149. Ni–NTA agarose gel column and sodium dodecyl sulfate–polyacrylamide gel electrophoresis SDS-PAGE) IF:2.226
