无机焦磷酸酶(Inorganic Pyrophosphatase, PPase)可催化一分子焦磷酸盐转化为两分子磷酸盐离子。在核酸扩增实验中, PPase可以水解随着反应生成的无机焦磷酸盐,这是一个高放能的反应,可使反应平衡向产物生成端移动,从而邃免对反应体系的抑制。在mRNA疫苗制品的生产过程中,加入PPase可以提高mRNA的产量。但对于以mRNA为终产物的产品来说,加入的PPase属于外源物质,需要在工艺纯化过程中被去除,因此需要对PPase的残留量进行检测以评估纯化工艺对于蛋白残留的去除效果以反确认mRNA疫苗制品中的PPase残留是否被纯化至一定的可接受范围。本试剂盒应用双抗夹心中联免疫检测(ELISA)〉的实验原理进行PPase残留量检测,将PPase标准品和待测样本加入预包被抗PPase抗体的番标板(36706-A),然后加入稀释后的生物素标记的检测抗体(36706-C),最后加入Streptavidin-HRP，SA-HRP)(36706-D),形成抗体+抗原+抗体-Biotin+SA-HRP复合物,洗板后加入TMB显色液〔36706-H)是色。TMB在HRP畹的催化下由无色转化成蓝色并在终止液(36706-|)的作用下最终转化成黄色。黄色的深浅与样本中被检测到的PPase的量呈正相关。
- 符合法规：按照Chp、USP、ICHQ2（R2）等要求进行全面验证；
- 保障品质：包被和检测抗体、标准品等原材料全自主研发，可溯源；
- 配合审计：生产工艺稳定，批间差可控，有完善的审计文件；
- 灵敏度高：定量下限(LLOQ)可达0.25 ng/mL，检测下限(LLOD)低至0.165 ng/mL；
- 精密度高：批内重复性高CV＜10%，批间差异小即中间精密度CV＜15%；
- 准确性高：样本加标回收率均在70%~130%范围内；
- 专属性强：向样本中添加不同类型的干扰物， 测试值未见显著性差异；
- 稳定性好：试剂盒在37℃条件下可稳定放置7天，性能不受影响。
1. 检测范围
无机焦磷酸酶ELISA线性范围为0.25～16 ng/mL，R2=1.000，各浓度检测值CV≤10%。标准曲线结果如下：
| 标准品浓度（ng/mL） | 检测平均值（ng/mL） | 回收率（%） | 浓度CV% |
| 16 | 15.981 | 99.9% | 4.1% |
| 8 | 8.013 | 100.2% | 4.1% |
| 4 | 4.035 | 100.9% | 3.7% |
| 2 | 1.925 | 96.3% | 2.7% |
| 1 | 1.039 | 103.9% | 2.3% |
| 0.5 | 0.510 | 102.1% | 4.6% |
| 0.25 | 0.262 | 104.6% | 5.0% |
| 0 | / | / | / |
2. 准确度
向细胞上清样本中添加高中低三个浓度Inorganic Pyrophosphatase标准品，同时将高值添加的样本做倍比稀释。对倍比稀释样本，以及不同加标浓度样本，未加标样本中的Inorganic Pyrophosphatase进行检测，线性回收率和加标回收率在75%-125%之间。结果如下：
加标回收率=实测值/（加标准品×50%+加标本值×50%）
| 样本稀释比例 | 实测值(ng/ml) | 稀释线性 | 样本加标 | 实测值(ng/ml) | 回收率 |
| 1×(S+Std1) | 8.223 | / | S+Std1 | 8.223 | 100.1% |
| 2× | 3.980 | 96.8% | S+Std3 | 1.973 | 89.1% |
| 4× | 1.865 | 93.7% | S+Std5 | 0.550 | 76.9% |
| 8× | 0.921 | 98.8% | 培养上清液 | 0.431 | / |
| 16× | 0.482 | 104.7% | / | / | / |
2~8℃保存，未拆封有效期1年。
*收到货后，请检查各组分是否齐全，并立即放入对应的保存温度中储存。
相关产品
