SulfoLink Coupling Agarose Resin是一类预活化的琼脂糖树脂,其纯化原理在于可以通过与巯基的反应实现抗原的固定化,进而利用抗原抗体的特异性反应对免疫血清中的抗体进行高效纯化,是多克隆抗体生产中不可缺少的纯化介质。
基质(Matrix) |
4%琼脂糖微球 |
配体(Ligand) |
碘乙酸衍生物 |
粒径(Bead size) |
45-165 µm |
载量(Capacity) |
4.0-6.0 mg HC-7多肽/mL基质 |
最大压力(PressureMax) |
0.1 MPa, 1 bar |
pH稳定范围(pH range) |
5-10 |
储存缓冲液(Buffer) |
1 M NaCl溶液 |
2~8℃保存,有效期2年。
Q:该产品所采用的封闭液是什么?
A:50 mM Tris,5 mM EDTA-Na,50 mM L-半胱氨酸,pH 8.5。
Q:为什么柱子流速低?
A:可能是筛板被堵塞,建议清洗或更换筛板。
Q:为什么偶联液中蛋白或多肽沉淀?
A:可能是蛋白或多肽不溶,建议偶联液中加入<30%的 DMSO 或DMF 或 6 M 盐酸胍促进样品溶解。
Q:为什么洗脱组分纯度低?
A:可能是树脂没有彻底清洗,建议增加结合/洗杂液体积。
Q:填料的偶联原理?
A:偶联原理如图,偶联液的要求是中性偏碱条件, 偶联后通过半胱氨酸上的巯基封闭剩余未偶联上蛋白的碘乙酸位点
Q:除洗脱液外均为碱性,在这里酸碱性的作用?
A:酸碱交替清洗去除偶联不牢的组分以减少后续纯化时配体脱落。
Q:偶联抗原之后可以重复使用,这个重复使用有没有次数的限制?
A:取决于抗原稳定性,抗原是蛋白还是多肽,一般可以用接近10次左右。用几次之后不结合抗体了说明不能用了。
Q:1)每mg抗原中TECP最大量添加量为12mg,在实验中如何确定TECP用量?
2)抗原上的巯基位点有没有数量限制?
A:1)TCEP这个测试过已经是完全过量可以还原蛋白。如需调整TECP用量可以做几个浓度梯度对比还原后巯基的数量。
2)没有限制。
Q:1ml试剂(0.5填料)能结合多少mg的抗原多肽?
A:1.5mg左右