Hifair® V one-step RT-gDNA digestion SuperMix for qPCR是Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)的升级版,可在同一管中进行逆转录和基因组去除两个反应,操作简便,可有效降低复杂加样过程造成的样品污染和RNA降解的风险。本产品中5×Hifair® One Step RT SuperMix中含逆转录反应所需的全部试剂(Hifair® V Reverse Transcriptase, RNase Inhibitor, Oligo(dT)18 Primer, Random Primer, dNTPs, Buffer),反应时只需加入gDNA Remover Mix、模板RNA和水即可高效地合成第一链cDNA,同时去除基因组DNA污染。另外,本产品提供了5×Hifair® One Step No-RT Control SuperMix,用于配置无逆转录酶的对照,判断qPCR模板是否来自cDNA。
本产品中的Hifair® V Reverse Transcriptase可耐受高达60°C的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。逆转录产物兼容探针法与染料法qPCR,探针法与染料法qPCR Mix分别推荐翌圣Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix (Cat#11211)和Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix (Cat#11184),进行高性能基因表达分析。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 11142ES10(10T) | 11142ES60(100T) |
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11142-A | 5×Hifair® One Step RT SuperMix | 40 μL | 400 μL |
11142-B | gDNA Remover Mix | 10 μL | 100 μL |
11142-C | 5×Hifair® One Step No-RT Control SuperMix | 20 μL | 40 μL |
11142-D | RNase free H2O | 1 mL | 2×1 mL |
- 用于qPCR:mix形式,逆转录与gDNA 去除一管内同时进行
- 逆转录程序:最适灭活时间30 sec-5 min
- 检出率:1 pg-1 ug 检出率优于竞品
- 逆转录效率:不同GC 基因扩增逆转录效率(CT)优于竞品
- gDNA 去除能力:消化200 ng基因组,残留检测CT值小于竞品
- 试剂盒稳定性:4°C存放14天
- 反转录产物稳定性:37°C保存14天,反复冻融50次
- 物种适用性:适用于人、小鼠、拟南芥、大肠杆菌等样本
- 逆转录效率好
图. 不同RNA投入量条件下产品的逆转录效率。以293T细胞总RNA为模板,使用Yeasen、进口品牌进行逆转录,得到的cDNA 进行qPCR 定量分析。结果显示,RNA 投入量为10 ng 时,Yeasen产品的逆转录效率优于进口品牌产品;RNA 投入量为1 μg 时,Yeasen产品的逆转录效率和进口品牌产品相当。
- 检出率高
图. 不同品牌1 pg-1μg 样品相关基因检出率。以1 pg-1μg(7个梯度)的293T细胞总RNA为模板,使用Yeasen、A*品牌、B*品牌产品进行逆转录,得到的cDNA 进行qPCR 定量分析。结果显示,Yeasen产品的1 pg-1 ug检出率优于其他品牌产品。
冰袋运输。-20°C保存,有效期12个月。
Q: 反转录后的产物是什么?是双链的DNA吗?
A:反转录后的产物是RNA和cDNA的杂交链,并不是DNA双链,其稳定性相较于后者来说要低一些。
Q: 反转录后产物可以用于PCR么?
A:这款产品是配套用于下游荧光定量PCR的,其中预混的引物保证荧光定量中所需的cDNA短片段,所以在用于长片段PCR时,可能会出现非特异扩增。若后续需要进行PCR或者长片段PCR,推荐使用11149ES或者11150ES进行。
[1] Ji C, Li J, Jiang C, et al. Zinc and nitrogen synergistic act on root-to-shoot translocation and preferential distribution in rice. J Adv Res. 2021;35:187-198. Published 2021 Apr 20. doi:10.1016/j.jare.2021.04.005(IF:10.479)