MBPSep Dextrin Agarose Resin 是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白（MBP）标签蛋白的亲和层析介质，MBP可促进连接蛋白的正确折叠，增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF可以一步纯化MBP融合蛋白，结合的融合蛋白可以用10 mM麦芽糖进行温和洗脱，保护了目的蛋白的活性，MBP融合部分后续可用位点特异性蛋白酶切除。
此外，本品以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，具有更高的物理化学特性，可以耐受更高的压力，在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化，更适于工业大规模蛋白的纯化。
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基质（Matrix） |
高度交联的6%琼脂糖微球 |
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配体（Ligand） |
糊精 |
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粒径（Bead size） |
45-165 µm |
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载量（Capacity） |
>10 mg MBP蛋白（80 kDa）/mL基质 |
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最大压力（PressureMax） |
0.3 MPa，3 bar |
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pH稳定范围（pH range） |
3-12 |
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储存缓冲液（Buffer） |
含20%乙醇的1×PBS |
2~8℃保存，有效期2年。
Q：为什么柱子反压过高？
A：可能是填料被堵塞；裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上样前最好用 0.22µm 或0.45µm 滤膜过滤，或离心去除。
Q：为什么洗脱组分中无目的蛋白？
A：先跑胶确定蛋白是未结合还是未洗脱，通过对比纯化样品、流穿液、洗脱液的目的蛋白条带确定。
如果是未结合：1、可能是样品或缓冲液中存在一些干扰因素如非离子去污剂；建议样品透析或用结合buffer 稀释。2、可能是标签聚集，可以加入1mM的DTT改善此情况。
Q：为什么洗脱样品较杂？
A：1、可以先尝试下在洗杂步骤提高盐浓度或者洗杂buffer中加入终浓度0.1%非离子型去污剂。
2、可能是目的蛋白降解；可以WB验证，建议加一些蛋白酶抑制剂，如 PMSF等。
Q：该产品使用之前能剧烈摇晃吗？
A：不能剧烈摇晃，会破坏高度交联的 6%琼脂糖微球；使用前可轻轻充分颠倒若干次， 使琼脂糖珠混合均匀。
Q：重复使用次数是多少？
A：具体使用次数与样品有关，可以耐受0.1 M氢氧化钠清洗5次后载量仍有80%以上。
Q：孵育法的操作步骤？
A：1）根据纯化的样品量，取适量填料加入离心管中，1000 rpm 离心 1 min，吸弃上清;
2)向离心管中加入5 倍介质体积的平衡液清洗介质，1000 rpm 离心1 min，吸弃上清，重复两次以上。
3)加入样品，封闭离心管，4℃振荡孵育 2-4 h 或者37度孵育30 min-2h。
4)孵育结束后，1000 rpm 离心1 min，吸弃上清，上清保留作为流穿，用于电泳鉴定。
5)用5倍介质体积的洗杂液清洗介质，1000 rpm 离心1 min ，去除上清（注意不要吸到介质），重复 3-5次，中间建议更换新离心管。
6)加入3-5 倍柱体积的洗脱液进行洗脱，温育 5 min，1000 rpm 离心1 min可重复 2-3次。
Q：第一次使用效果是挺不错的，但第二次就不好了
洗脱结束后可以用较高浓度（20-50mM）的麦芽糖进行一次较为彻底的洗脱，然后用中性缓冲液冲洗，清洗后保存在20%乙醇 1XPBS中，保存温度2-8℃。如果使用氢氧化钠清洗的话，后续是需要用中性缓冲液例如PBS冲洗至ph中性，只使用纯水冲洗的话无法达到中和ph的效果，可能会有微量氢氧化钠残留在填料上影响后续纯化。
Q：样品表达量变低，有什么建议？
可以尝试降低上样流速，延长结合时间来提高目的蛋白和填料的结合效果。
- Deng X, Peng FL, Tang X, Lee YJ, Lin HH, Liu B. The Arabidopsis BUB1/MAD3 family protein BMF3 requires BUB3.3 to recruit CDC20 to kinetochores in spindle assembly checkpoint signaling. Proc Natl Acad Sci U S A. 2024;121(12):e2322677121. doi:10.1073/pnas.2322677121(IF:11.1)
- Huang J, Wu X, Gao Z. The RING-type protein BOI negatively regulates the protein level of a CC-NBS-LRR in Arabidopsis. Biochem Biophys Res Commun. 2021;578:104-109. doi:10.1016/j.bbrc.2021.09.038(IF:3.575)
