Hoechst 33342/PI 双染试剂盒(Hoechst 33342/PI Double Stain Kit)采用Hoechst 33342和碘化丙啶(PI)双染的方法以区分凋亡细胞和坏死细胞的试剂盒。其检测原理是:细胞核荧光染料Hoechst 33342可以穿透细胞膜,嵌入双链DNA后释放蓝色荧光。对于正常细胞,其可少许进入细胞膜使其染上低蓝色。而凋亡细胞由于细胞膜通透性增强,从而使得进入凋亡细胞内的Hoechst 33342明显多于正常细胞,荧光强度比正常细胞要高。另外,细胞发生凋亡时染色质会固缩,从而使得染料能更有效和聚集的结合于DNA,并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受损而不能有效的将Hoechst 33342排除到细胞外使其在细胞内的积累增加,这些特征都使得凋亡细胞经染色后荧光会比正常细胞明显增强。但细胞核荧光染料PI不能穿透细胞膜完整的正常细胞或凋亡细胞,即活细胞对PI染料拒染。而对于坏死细胞,其细胞膜的完整性在早期即已丧失,可被PI染色。
经上述两种染料双染后,使用流式细胞仪或荧光显微镜检测时,正常细胞为弱红色荧光+弱蓝色荧光,凋亡细胞为弱红色荧光+强蓝色荧光,坏死细胞为强红色荧光+弱蓝色荧光。
本试剂盒染色快速方便,可用一步法或者两步法进行染色。使用流式细胞仪检测时,无需稀释等配制过程,也无需再准备其它任何溶液。本试剂盒足够检测100个样品,每个样品的细胞数量可达105-106个。
冰袋运输。 4℃保存,有效期12个月。-20℃保存,有效期24个月,建议分装避免反复冻融。
Q:Hoechst33342/PI双染试剂盒原理及结果判断?
A:Hoechst33342/PI主要是区分凋亡细胞和坏死细胞的,细胞发生凋亡时,染色质会固缩。Hoechst33342可以穿透细胞膜,染色后凋亡细胞荧光会比正常细胞明显增强。碘化丙啶(PI)不能穿透细胞膜,对于具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色。而对于坏死细胞,其细胞膜的完整性丧失,碘化丙啶(PI)可以染色坏死细胞。
正常细胞:弱红色荧光+弱蓝色荧光
凋亡细胞:弱红色荧光+强蓝色荧光
坏死细胞:强红色荧光+弱蓝色荧光
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