GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF是一种GST标签蛋白纯化树脂,可以一步纯化各种表达系统中谷胱甘肽-S-转移酶、谷胱甘肽依赖性蛋白和谷胱甘肽重组衍生物。在结构上,该树脂是以高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质,通过12个原子的间隔臂,用化学方法共价结合还原型谷胱甘肽制作而成,具有更高的物理化学特性,可以耐受更高的压力,在相对较高的流速下,实现对目的蛋白的纯化,更适于工业大规模蛋白的纯化。
GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1 mL是装填了GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF的一种中压预装柱,规格1 mL,预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA 等,方便客户操作。
基质(Matrix) |
高度交联的4%琼脂糖微球 |
配体(Ligand) |
通过12原子间隔臂偶联的谷胱甘肽 |
粒径(Bead size) |
45-165 µm |
载量(Capacity) |
>10 mg GST蛋白(40 kDa)/mL基质 |
最大压力(PressureMax) |
0.3 MPa,3 bar |
pH稳定范围(pH range) |
3-12 |
储存缓冲液(Buffer) |
含20%乙醇的1×PBS |
2~8℃保存,有效期2年。
Q:为什么洗脱组分中无目的蛋白?
A:过度的裂解使目的蛋白变性,建议使用温和的裂解条件,实验条件以经验为准。
Q:为什么柱子反压过高?
A:可能是缓冲液太黏稠,有机试剂或蛋白稳定试剂(如甘油等)可能会引起反压增高, 降低操作流速。
Q:为什么目的蛋白没有完全洗脱下来?
A:可能是洗脱液中谷胱甘肽浓度太低,建议增加洗脱液中谷胱甘肽浓度,可尝试用50 mM Tris-HCl,20-40 mM 还原型谷胱甘肽pH 8.0 洗脱。
Q:为什么电泳或 Western Blot 检测中发现多条带?
A:可能是抗体与E. coli 的各种反应,建议抗体吸附E. coli 蛋白:GST-抗体;超声处理去除 GST 抗体,可以用 Western Blot 检测。
Q:洗脱液怎么配?
A:按说明书用平衡缓冲液配制还原性谷胱甘肽(货号:60342)即可,配完后需要检测PH是否跟平衡缓冲液一致,部分谷胱甘肽溶解后ph会偏酸。