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T7 High Yield RNA Synthesis Kit for Co-transcription( low dsRNA)
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T7 High Yield RNA Synthesis Kit for Co-transcription( low dsRNA)用于共转录加帽体系,试剂盒进行了共转录反应体系的优化,使用的T7 RNA聚合酶是对野生型T7 RNA聚合酶进行了改造优化,突变得到的可以大幅度降低dsRNA含量的T7 RNA 聚合酶,以含有T7 启动子序列的线型双链DNA为模板,NTPs以及帽子类似物为底物,对启动子下游的DNA序列进行转录,高效合成带有Cap1结构的单链RNA。转录时可在底物中加入修饰的核苷酸,制备生物素或染料标记的RNA。

本试剂盒可以合成长转录本以及短转录本,以1 μg的模板投入量可以产生100-200 μg的RNA。该试剂盒使用共转录加帽策略来产生 Cap1 RNA。此外,UTP 也被 N1-Me-Pseudo UTP 取代以降低免疫原性。转录合成的RNA可用于诸如RNA结构与功能研究、RNA酶保护、探针杂交、RNAi、显微注射及体外翻译等多方面的下游应用。




产品特色

产量高:稳定在9mg/mL以上

dsRNA含量低:dsRNA的含量显著降低了至少10倍以上

片段加帽率高:均超过99%


应用案例

1、 在不同长度的应用场景下,dsRNA无论跟 WT T7 ,还是竞品,在保证其他指标不降的前提下,dsRNA 均有极显著下降。

片段长度T7 RNA pol产量(mg/mL)完整度(%)dsRNA含量((1ug RNA产生 ng的dsRNA)
4KT7-WT12.488.30.4273
T7-低dsRNA12.189.90.0129
竞品A11.087.80.0323
9KT7-WT9.581.92.9180
T7-低dsRNA9.082.00.0379
竞品A7.278.70.1805

2、降低Cap analog的投入量,在不同的片段长度,以及与WT的对比下,投入量降低到2.5mM, 仍能得到优异的加帽率。同时在细胞层面上,也能得到优异的表现。

分别对4K 和1K 片段进行帽子添加量验证,显示添加量可低至2.5mM,,加帽率和细胞功能验证无明显差异(48 h);

低dsRNA T7 和WT 也无显著性差异;

存储条件

-25~-15℃保存,有效期1年。

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