T7 High Yield RNA Synthesis Kit for Co-transcription( low dsRNA)
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T7 High Yield RNA Synthesis Kit for Co-transcription( low dsRNA)用于共转录加帽体系,试剂盒进行了共转录反应体系的优化,使用的T7 RNA聚合酶是对野生型T7 RNA聚合酶进行了改造优化,突变得到的可以大幅度降低dsRNA含量的T7 RNA 聚合酶,以含有T7 启动子序列的线型双链DNA为模板,NTPs以及帽子类似物为底物,对启动子下游的DNA序列进行转录,高效合成带有Cap1结构的单链RNA。转录时可在底物中加入修饰的核苷酸,制备生物素或染料标记的RNA。
本试剂盒可以合成长转录本以及短转录本,以1 μg的模板投入量可以产生100-200 μg的RNA。该试剂盒使用共转录加帽策略来产生 Cap1 RNA。此外,UTP 也被 N1-Me-Pseudo UTP 取代以降低免疫原性。转录合成的RNA可用于诸如RNA结构与功能研究、RNA酶保护、探针杂交、RNAi、显微注射及体外翻译等多方面的下游应用。
产品特色
产量高:稳定在9mg/mL以上
dsRNA含量低:dsRNA的含量显著降低了至少10倍以上
片段加帽率高:均超过99%
应用案例
1、 在不同长度的应用场景下,dsRNA无论跟 WT T7 ,还是竞品,在保证其他指标不降的前提下,dsRNA 均有极显著下降。
片段长度 | T7 RNA pol | 产量(mg/mL) | 完整度(%) | dsRNA含量((1ug RNA产生 ng的dsRNA) |
4K | T7-WT | 12.4 | 88.3 | 0.4273 |
T7-低dsRNA | 12.1 | 89.9 | 0.0129 | |
竞品A | 11.0 | 87.8 | 0.0323 | |
9K | T7-WT | 9.5 | 81.9 | 2.9180 |
T7-低dsRNA | 9.0 | 82.0 | 0.0379 | |
竞品A | 7.2 | 78.7 | 0.1805 |
2、降低Cap analog的投入量,在不同的片段长度,以及与WT的对比下,投入量降低到2.5mM, 仍能得到优异的加帽率。同时在细胞层面上,也能得到优异的表现。
分别对4K 和1K 片段进行帽子添加量验证,显示添加量可低至2.5mM,,加帽率和细胞功能验证无明显差异(48 h);
低dsRNA T7 和WT 也无显著性差异;
存储条件
-25~-15℃保存,有效期1年。
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