CleascripTM T7 RNA Polymerase (low dsRNA, 250 U/μL)
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本产品是大肠杆菌重组表达来源的噬菌体 T7 RNA 聚合酶,是对野生型T7进行了改造优化,突变得到的可以大幅度降低dsRNA含量的T7 RNA 聚合酶。以含有 T7 启动子序列的双链 DNA 为模板,以 NTP 为底物,合成与启动子下游的反向单链 DNA 互补的RNA。双链线性平末端或 5’突出末端 DNA均可作为 T7 RNA 聚合酶的底物模板,因此线性质粒、PCR 产物均可用作体外合成 RNA 的模板。

产品特色

1. 高效低dsRNA合成

dsRNA含量显著降低:与传统T7 RNA聚合酶相比,dsRNA含量降低了至少10倍以上,有效避免了dsRNA引发的免疫激活和对mRNA功能的干扰。

高产量:mRNA产量稳定在9mg/mL以上,满足大规模生产的需要。

高完整度:转录产物的完整度不低于野生型T7 RNA聚合酶,确保mRNA的质量和功能。

2. 高效加帽与低投入

高加帽率:片段加帽率均超过99%,确保mRNA的稳定性和翻译效率。

低Cap analog投入量:在不同片段长度下,Cap analog投入量降低至2.5mM,仍能实现优异的加帽率,显著降低了生产成本。

3. 优化的筛选与验证

双重筛选策略:通过构建随机文库与FADS高通量筛选方法,以及半理性设计与微孔板技术,筛选出超过10^6的随机突变文库,最终选出一款性能卓越的突变体进行商品化应用。


产品特性:

来源重组 E. coli
最适温度37℃
活性250 U/μL
宿主核酸残留<10 fg/U
宿主蛋白残留<50 ppm
RNA 酶残留阴性
储存缓冲液50mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0.1% Triton X-100,50%(v/v)甘油,pH7.9@25℃
活性单位定义在 37℃、pH8.0 的条件下,1 h 内使 1 nmol 的 [3H] GMP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为一个活性单位。



应用案例

1、 在不同长度的应用场景下,dsRNA无论跟WT T7 ,还是竞品,在保证其他指标不降的前提下,dsRNA 均有极显著下降。

片段长度T7 RNA pol产量(mg/mL)完整度(%)dsRNA含量((1ug RNA产生 ng的dsRNA)
4KT7-WT12.488.30.4273
T7-低dsRNA12.189.90.0129
竞品A11.087.80.0323
9KT7-WT9.581.92.9180
T7-低dsRNA9.082.00.0379
竞品A7.278.70.1805

2、降低Cap analog的投入量,在不同的片段长度,以及与WT的对比下,投入量降低到2.5mM, 仍能得到优异的加帽率。同时在细胞层面上,也能得到优异的表现。

Cap analog投入量(mM)加帽率(%)-4K1K
WTmutantWT
10100100100
5100100100
2.510010099.7


存储条件

-25 ~ -15℃保存,有效期1年。

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