T4 Polynucleotide kinase是一种多聚核苷酸5’-羟基激酶,能够催化ATP的γ-磷酸基团转移到寡核苷酸链(双链或单链DNA或者RNA)的5’-羟基末端以及3’-单磷酸核苷上,并且该反应是可逆的。T4 Polynucleotide kinase同时具有3’-端磷酸酶活性,将3’-磷酸基团从寡核苷酸的3’-磷酸末端、脱氧3’-单磷酸核苷和脱氧3’-二磷酸核苷上水解。当ADP存在时,T4 PNK具有5’-端磷酸酶活性,催化5’-P-寡聚/多聚核苷酸和ATP末端5’-磷酸基团交换,适用于DNA文库的构建以及末端标记制作探针。与 T4 Polynucleotide kinase (Cat#12902ES)相比,UCF.ME® T4 polynucleotide Kinase 的宿主残留更低,适合对背景菌要求更为严格的应用场景,如病原微生物检测领域等。
应用场景:
- DNA或RNA5“未端的磷酸化,以便进行连接反应;
- DNA或RNA的未端标记,用作探针和进行DNA测序;
- 将3端已经磷酸化的单核苷酸5“磷酸化,制备pNp底物,用于添加到DNA或RNA的3端;
- 对3端有磷酸基团的寡核苷酸的5“端进行标记。
- 超低宿主残留(< 0.005 copies/1 U);
- 建库性能与进口品牌A一致;
- 无核酸外切酶、切口酶残留。
- E.coli基因组DNA残留< 0.005 copies/1 U
对不同批次的翌圣超低残留T4 PNK (Cat#14503ES) 进行宿主 (E.coli)基因组DNA残留检测,结果显示翌圣超低残留T4 PNK宿主gDNA残留远低于0.005 copies/1 U。
图1. T4 DNA PNK E.coli 基因组DNA残留检测结果
- 建库性能与进口品牌A一致
将翌圣超低残留T4 PNK (Cat#14503ES)与进口品牌A的同类产品,按照图示所用量进行牛gDNA建库测试,结果表明翌圣超低残留T4 PNK在DNA建库性能与进口品牌A一致。
图2. 翌圣与品牌A的T4 DNA PNK的建库性能对比
- 无切口酶、核酸外切酶残留
将100 U不同批次的翌圣超低残留T4 PNK (Cat#14503ES)分别与底物DNA在37℃孵育4 h,琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,翌圣超低残留T4 PNK无切口酶、核酸外切酶残留。
图3. 翌圣T4 DNA PNK无切口酶、外切酶残留
-25~-15℃保存,有效期1年。