Strep-Tag II为8个氨基酸的小标签(WSHPQFEK),由于标签小,仅为1.06 kDa左右,不影响融合后蛋白质的结构和功能,因此无需去除该标签。其特异性高,单步纯化纯度高,纯化条件温和,蛋白两端均可融合等突出特点迅速得到了广泛应用。Twin Strep-tag II是一个顺序排列的两个Strep-tag II序列(通过内部氨基酸连接),该标签能够像Strep-tag II一样进行温和、快速的纯化。
Streptactin是最稳定的蛋白之一,其偶联至高度交联的4%琼脂糖微球上,可用于各种表达系统,包括杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌中含有Strep-TagII标签蛋白纯化,同时该树脂也可用于TwinStrep-TagII标签纯化。
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基质 | 高度交联的4%琼脂糖微球 |
配体 | Streptactin |
粒径 | 45-165 µm |
载量 | 3-5 mg Twin Strep-tag II蛋白/mL 介质 |
最大流速 | 300cm/h |
储存缓冲液 | 含20%乙醇的1×PBS |
冰袋运输。2~8℃保存,有效期2年。
Q:用脱硫生物素洗脱,除了用HABA再生以外,还可以用氢氧化钠再生吗?可以重复使用几次?
A:使用脱硫生物素作为洗脱液,1 mM HABA或0.1M氢氧化钠再生10次左右。
Q:这个产品可以用D-生物素洗脱吗?
A: 可以用,但是用D-生物素洗脱后必须用高浓度氢氧化钠再生,重复使用时载量会明显变低。所以如果填料需要重复使用就必须用脱硫生物素洗脱。
Q:这个产品属于第几代?
A: 我们产品属于第二代。第三代填料的洗脱液可用D-生物素,能在低浓度生物素或者变性等特殊条件下结合Strep标签蛋白,再生方法可用氢氧化钠再生且重复使用效果较好。第三代我们目前没有。
Q:这个产品耐压多少?
A: 填料耐压0.3MPa。
Q:如果我的Strep-Tag II 标签是位于我融合蛋白的中间位置 可以用这个树脂吗?
A: 要看标签的暴露情况
Q:如果用蛋白洗脱不下来,那怎么办?
A: 在洗脱液中加终浓度0.1%-0.5%Triton X-100 ,室温混合孵育30min。
Q:一个streptactin beads上大概有多少个strep-tag II 的结合位点?我想知道这一个beads上能负载多少个蛋白?
A: 1ml微球上的strep-tag II结合位点约为1.8×10^17个,1ml填料中的微球颗粒数约为1×10^6
Q:用HABA再生后填料变色?并洗不白?如下图
A: 这个是HABA和配体结合,可以平衡后直接上样,strep标签蛋白会将HABA竞争下来。