UltraNuclease(全能核酸酶),又称非限制性核酸内切酶、广谱核酸酶;是一种来源于Serratia Marcescen的非特异性核酸内切酶,可在链内任意核苷酸间进行切割,将核酸完全消化成2-5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸,能够在非常广泛的条件下(6 M Urea,0.1 M Guanidine HCl,0.4% Triton X-100,0.1% SDS,1 mM EDTA,1 mM PMSF)降解各种形式的(双链,单链,线状,环状,天然或变性)DNA和RNA,广泛用于去除生物制品中的核酸。
本品经基因工程改造在Escherichia coli (E. coli)中表达纯化,纯度≥ 99%,可用于科学研究中降低细胞上清和细胞裂解液的粘度,提高蛋白纯化效率及功能研究,并且可以有效防止细胞治疗和疫苗研究中人外周血单核细胞(PBMC)的结团。
本品以无菌液体酶的形式提供,储存于缓冲液(20 mM Tris-HCl pH 8.0,2 mM MgCl2,20 mM NaCl,50% Glycerol)中,无色透明液体。
产品性质
来源 | E. coli |
分子量(Molecular Weight) | 26.5 kDa |
等电点 | 6.85 |
纯度(Purity) | ≥ 99%(HPLC) |
酶活(Enzyme Activity) | 250-300 U/μL |
比活(Specific Activity) | ≥ 1.5×106 U/mg蛋白 |
最适pH(Optimum pH) | 8.0(工作范围pH 6-10) |
最适温度(Optimum Temperature) | 37℃(工作范围0-42℃) |
辅助因子(Cofactor) | 1-10 mM Mg2+ |
储存缓冲液(Storage Buffer) | 20 mM Tris-HCl pH8.0,2 mM MgCl2,20 mM NaCl,50% Glycerol |
活性单位定义(Unit Definition) | 在37℃,pH 8.0反应条件下,2.625 mL反应体系中,在30 min内使△A260吸收值变化1.0(相当于完全消化37 μg鲑鱼精DNA成为寡核苷酸)所用的酶量定义为一个活性单位(U)。 |
高活性与高效性:具备高比活性(比活>1.50 x 10⁶ U/mg),能够快速、高效地降解核酸。
高安全性:经过严格的无菌、内毒素、支原体、外源病毒等检测,确保产品安全性,尤其适用于对安全性要求极高的临床或上市申报项目。
高稳定性:经受住加速、冻融、实时稳定性等多重验证,保证产品在不同储存和使用条件下的高性能,确保结果的可靠性。
法规支持与保障:完成DMF备案(MF036357),为产品的临床及上市申报提供有力支持,确保产品符合相关法规要求。
单因素对比测试结果显示:与竞品M 公司之间无显著性差异
干冰运输。-15℃ ~ -25℃保存,有效期2年。
Q:稀释后每次用多少量,如何试梯度?起始加多少
A:看不同的实验要求,添加量可以按照 1/100-1/10000 之间。
Q:反应抑制因子有哪些?
A:在含有以下物质,Benzonase 的活性会降低 50%或以上:>150mM 一价阳离子,>100mM 磷酸盐,>100mM 硫酸铵,>100mM 盐酸胍,>0.1%SDS,>1%Triton X-100,>1%Tween 20。
Q:哪些溶液可以作为反应缓冲液?
A:常用生物缓冲液,如TBS、MOPS(pH6-8)等。
Q:怎样灭活 Benzonase 核酸酶?且如何去除?
A:采用 EDTA 螯合金属离子(浓度大于6 mM)会可逆地抑制 Benzonase 核酸酶活性,极端条件会造成不可逆失活,例如:100mM-NaOH,70℃处理 30min 等。Benzonase 核酸酶可采用阴离子交换柱或气相色谱法从目的产物中分离出去,由于这种核酸内切酶及其稳定,建议在终产物要求排除核酸酶的应用中不要使用Benzonase 核酸酶。
Q:全能核酸酶可否用于加入全血中,后续客户用于直接提取核酸,但有些全血会有结块拉丝的情况出现,A260/230比值偏大?
A:我们目前没有客户这样做过,如果为了处理细胞结团,加进去反应后通过换液就可以把全能核酸酶给去掉;工业上病毒纯化中过柱可以把全能核酸酶去掉。您这个加了后进行核酸提取,不能保证全能核酸酶完全去除干净,一旦有残留,提取的核酸都会被切割降解。70℃30min可以灭活,不确定对您血液样本是否有影响,按说明书的条件是1ul全能核酸酶相当于可以处理10的9次方个细胞,200ul全血不知道有多少细胞没做过全血的,无法推荐,您可以拉梯度看看。
[1] Lin J, Chen Z, Yang L, et al. Cas9/AAV9-Mediated Somatic Mutagenesis Uncovered the Cell-Autonomous Role of Sarcoplasmic/Endoplasmic Reticulum Calcium ATPase 2 in Murine Cardiomyocyte Maturation. Front Cell Dev Biol. 2022;10:864516. Published 2022 Apr 1. doi:10.3389/fcell.2022.864516(IF:6.684)
[2] Kang D, Liu Y, Song Y, Fang B, Zhang Q, Hu L. Triptolide Shows High Sensitivity and Low Toxicity Against Acute Myeloid Leukemia Cell Lines Through Inhibiting WSTF-RNAPII Complex. Front Oncol. 2022;12:811850. Published 2022 Feb 16. doi:10.3389/fonc.2022.811850(IF:6.244)