D-荧光素（D-Luciferin）是荧光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍应用于整个生物技术领域，特别是体内活体成像技术。其作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下，荧光素（底物）能够被氧化发光。当荧光素过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性。将携带荧光素酶编码基因（Luc）的质粒转染入细胞后，导入研究动物如大、小鼠体内，之后注入荧光素，通过生物发光成像技术（BLI）来检测光强度变化，从而实时监测疾病发展状态或药物的治疗功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响，根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。
| 中文别名（Chinese synonym） | D-荧光素钾盐 |
| 英文别名（English synonym） | (S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid potassium salt; D-Luciferin firefly, potassium salt |
| CAS号（CAS NO.） | 115144-35-9 |
| 分子式（Formula） | C11H7N2O3S2 K |
| 分子量（Molecular weight） | 318.42 g/mol |
| 外观（Appearance） | 淡黄色粉末 |
| 溶解性（Solubility） | 易溶于水（60 mg/mL） |
| 纯度（Purity）（HPLC） | ＞99% |
1、使用D-荧光素产品探究肿瘤药物活体水平药效学评价。
肺部肿瘤形成和远处转移的生物发光信号和通过 BLI 量化肿瘤中的信号。
-25~-15℃干燥避光储存，有效期1年。
Q：荧光虫荧光素（ Firefly Luciferin）、甲虫荧光素（ Beetle Luciferin）和 D-Luciferin 有区别吗？
A：无区别。三者仅仅是不同公司在命名上的差异，均是化合物 (S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2
-thiazoline-4-carboxylic acid
Q：该系列产品主要用于哪些应用？
A：除用于活体成像外，荧光素类产品还用于荧光素酶参与的其他应用中，如 体外报告基因检测、微生物/病毒监测、焦磷酸测序等
Q：荧光素钠盐和 D-荧光素钠盐的区别？
A：荧光素钠盐：可用于细胞通透性检测，通过检测 OD490 处吸光度值测定 颜料的通透性。 D-荧光素钠盐：用于活体成像和报告基因系统，通过冷发光模块检测，不 需要激发光激发。
Q：荧光素钾盐、钠盐、自由酸区别？
A：三者的区别主要在于： 1）溶解性：盐形式易溶于水，其中钾盐溶解度为 60mg/ml，钠盐溶解度为 100mg/ml。自由酸不易溶于水，可用碳酸氢钠溶液弱碱调节溶解，其 在甲醇中的溶解度为10mg/ml，DMSO 中溶解度为 50mg/ml。 2）毒性方面：盐形式在使用过程中较方便，尤其是在体内成像实验中， 因其能够溶解在水中，反应毒性也会更小些（荧光素是一种由苯丙噻唑和 噻唑羧酸基团组成的低分子量有机化合物，有低毒性）。3）使用效果：无明显差异。在体内实验研究中，选用钾盐使用率较高。
Q：荧光素的纯度对实验有成影响吗？
A：有影响。99%以上的纯度较好。对于 99%纯度的荧光素，有 1%的固体杂质。若是这 1 g 的杂质溶 解在 25ml 的缓冲液中（该稀释比例是进行活体成像实验的标准稀释方法），此时杂质的浓度为 0.4 g/L。假 设杂质的分子量为 1000 g/mol,那么杂质的物质的量浓度为 400 μM，该浓度可能会抑制细胞内某些酶的作 用，并且有可能降低实验效果或对动物产生伤害。
Q：产品稳定性如何？
A：粉末避光保存于-20 或-70℃，有效期至少 1 年。
Q：活体成像底物作用原理？
A：D-荧光素（D-Luciferin）是荧光素酶（Luciferase）的常用底物。其作用 机制是在 ATP 和荧光素酶的作用下，荧光素（底物）能够被氧化发光。当 荧光素过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性。2、天然腔肠素（Coelenterazine native）是海肾荧光素酶（Rluc）和 Gaussia 荧光素酶（Gluc）等多种荧光素酶的作用底物。
Q：推荐仪器？多功能酶标仪能用吗？
A：推荐仪器：1、具有生物化学发光检测模块。荧光素产生的光可以被光度计或闪烁计数器检测。常见的活体成像仪器：如 IVIS® Lumina 小动物活体成像系统，德国 Bruker 公司的 In-Vivo Xtreme 多模式小动物活体成像仪。2、多功能酶标仪：需要和仪器厂家确认是否具体生物化学发光检测模块（注： 不能用荧光显微镜。）
Q：荧光素是能进入细胞膜吗？
A：荧光素是小分子，水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透细胞膜和血脑屏障
Q：尾静脉注射和腹腔注射哪个好？
A：都可以的。腹腔注射扩散较慢，持续发光长；静脉注射，扩散快，但发光持续时间很短。
Q：100mg可以注射几只小鼠？
A：腹腔注射（i.p.），按照150 mg/kg的荧光素/体重浓度进行注射，20g的C57小鼠为例，每只小鼠检测一次的用量：150 mg/kg×20g=3mg，100mg÷3mg=33只。仅供参考，具体的用量以试剂为准，未加损耗情况。
Q：D-荧光素钾盐，对动物有毒副作用吗？
A：一般情况下，D-荧光素钾盐不会对动物产生毒副作用。
Q：荧光素钾盐，分解率是多少？
A：没有该信息。
Q: 荧光素氧化发光的过程需要镁离子和ATP，D-荧光素钾盐做体外成像的话，ATP和镁离子怎么满足呢？体外推荐用蒸馏水溶解钾盐。
A: 该产品体外成像，所需的ATP和镁离子，1.需要通过细胞培养基来实现。所以需要添加了ATP和镁离子的细胞培养基来稀释探针；2.细胞内本身也含有一定量的ATP和镁,可以促进反应。大部分情况下，细胞含有的ATP和镁是足够进行D-荧光素盐的反应的，但细胞种类不同，含量也不一样。可以先尝试培养基不加额外的ATP和镁，正常做一下，看看效果。
Q：底物的激发波长和发射波长？
A：化学发光，无需激发波长。萤火虫荧光素检测波长是 560nm。海肾荧光素 检测波长是 465 nm。
Q：底物可以进入活细胞中吗？
A：可以通过血脑屏障，胎盘屏障和血液测试屏障，也可以进入活细胞。
Q：荧光素类注射方式和用量？
A：下面建议浓度来源于文献：1）注射方式：可通过腹腔注射或尾静脉注射 2）注射量：科学的方法是根据动力学曲线评估注射剂量。建立最初尝试注射剂量 为：150mg 底物/kg 小鼠体重。因此，购买量可按照上述方法计算：若 10 只小鼠，22 -25g，则需要底物 33 -37.5mg 。
Q：荧光素的发光特性如何？
A：荧光素腹腔注射老鼠后约 3 min 后，能够表达荧光素酶的细胞开始发光，10 min 后强度达到稳定的最高点，在最高点持续约 10 - 15 min 后开始衰减，可在注射后 10 -15 min 内检测。仅供参考，建议预实验建立荧光素酶 动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期
Q：活体成像实验，无效果的原因？
A：成功进行活体成像实验需要以下条件：目的组织或细胞表达荧光素酶基因；荧光素底物注射成功； 依赖于发光部位的组织厚度。若实验不成功，可从上述因素查找，荧光素酶基因是否表达，荧光素底物是否未正确注射，及发光部位较深等
[1] Gu Y, Wang Y, He L, et al. Circular RNA circIPO11 drives self-renewal of liver cancer initiating cells via Hedgehog signaling. Mol Cancer. 2021;20(1):132. Published 2021 Oct 14. doi:10.1186/s12943-021-01435-2(IF:27.401)
[2] Huang K, Liang Q, Zhou Y, et al. A Novel Allosteric Inhibitor of Phosphoglycerate Mutase 1 Suppresses Growth and Metastasis of Non-Small-Cell Lung Cancer [published correction appears in Cell Metab. 2021 Jan 5;33(1):223]. Cell Metab. 2019;30(6):1107-1119.e8. doi:10.1016/j.cmet.2019.09.014(IF:22.415)
[3] Dong X, Cheng R, Zhu S, et al. A Heterojunction Structured WO2.9-WSe2 Nanoradiosensitizer Increases Local Tumor Ablation and Checkpoint Blockade Immunotherapy upon Low Radiation Dose. ACS Nano. 2020;14(5):5400-5416. doi:10.1021/acsnano.9b08962(IF:14.588)
[4] Zheng DW, Gao F, Cheng Q, et al. A vaccine-based nanosystem for initiating innate immunity and improving tumor immunotherapy. Nat Commun. 2020;11(1):1985. Published 2020 Apr 24. doi:10.1038/s41467-020-15927-0(IF:12.121)
[5] Hu J, Su H, Cao H, et al. AUXIN RESPONSE FACTOR7 integrates gibberellin and auxin signaling via interactions between DELLA and AUX/IAA proteins to regulate cambial activity in poplar. Plant Cell. 2022;34(7):2688-2707. doi:10.1093/plcell/koac107(IF:11.277)
[6] Qi P, Huang M, Hu X, et al. A Ralstonia solanacearum effector targets TGA transcription factors to subvert salicylic acid signaling. Plant Cell. 2022;34(5):1666-1683. doi:10.1093/plcell/koac015(IF:11.277)
[7] Huang X, Qiu M, Wang T, et al. Carrier-free multifunctional nanomedicine for intraperitoneal disseminated ovarian cancer therapy. J Nanobiotechnology. 2022;20(1):93. Published 2022 Feb 22. doi:10.1186/s12951-022-01300-4(IF:10.435)
[8] Tang Y, Lin S, Yin S, et al. In situ gas foaming based on magnesium particle degradation: A novel approach to fabricate injectable macroporous hydrogels. Biomaterials. 2020;232:119727. doi:10.1016/j.biomaterials.2019.119727(IF:10.273)
[9] Zhang X, Zheng S, Hu C, et al. Cancer-associated fibroblast-induced lncRNA UPK1A-AS1 confers platinum resistance in pancreatic cancer via efficient double-strand break repair. Oncogene. 2022;41(16):2372-2389. doi:10.1038/s41388-022-02253-6(IF:9.867)
[10] Qiao K, Liu Y, Xu Z, et al. RNA m6A methylation promotes the formation of vasculogenic mimicry in hepatocellular carcinoma via Hippo pathway. Angiogenesis. 2021;24(1):83-96. doi:10.1007/s10456-020-09744-8(IF:9.780)
[11] Wu Q, Kuang K, Lyu M, et al. Allosteric deactivation of PIFs and EIN3 by microproteins in light control of plant development. Proc Natl Acad Sci U S A. 2020;117(31):18858-18868. doi:10.1073/pnas.2002313117(IF:9.412)
[12] Meng DF, Sun R, Liu GY, et al. S100A14 suppresses metastasis of nasopharyngeal carcinoma by inhibition of NF-kB signaling through degradation of IRAK1. Oncogene. 2020;39(30):5307-5322. doi:10.1038/s41388-020-1363-8(IF:7.971)
[13] Gao Y, Wang J, Han H, et al. A nanoparticle-containing polycaprolactone implant for combating post-resection breast cancer recurrence. Nanoscale. 2021;13(34):14417-14425. Published 2021 Sep 2. doi:10.1039/d1nr04125h(IF:7.790)
[14] Jiang W, Li T, Guo J, et al. Bispecific c-Met/PD-L1 CAR-T Cells Have Enhanced Therapeutic Effects on Hepatocellular Carcinoma. Front Oncol. 2021;11:546586. Published 2021 Mar 10. doi:10.3389/fonc.2021.546586(IF:6.244)
[15] Zhou Y , Zhou C , Zou Y , et al. Multi pH-sensitive polymer-drug conjugate mixed micelles for efficient co-delivery of doxorubicin and curcumin to synergistically suppress tumor metastasis. Biomater Sci. 2020;8(18):5029-5046. doi:10.1039/d0bm00840k(IF:6.183)
[16] Zhao X, Liu X, Zhang P, et al. Injectable peptide hydrogel as intraperitoneal triptolide depot for the treatment of orthotopic hepatocellular carcinoma. Acta Pharm Sin B. 2019;9(5):1050-1060. doi:10.1016/j.apsb.2019.06.001(IF:5.808)
[17] Li M, Wang J, Yu Y, et al. Characterization of Mesenchymal Stem Cells Derived from Bisphosphonate-Related Osteonecrosis of the Jaw Patients' Gingiva. Stem Cell Rev Rep. 2022;18(1):378-394. doi:10.1007/s12015-021-10241-8(IF:5.739)
[18] Zhang X, Li Y, Ji J, et al. Gadd45g initiates embryonic stem cell differentiation and inhibits breast cell carcinogenesis. Cell Death Discov. 2021;7(1):271. Published 2021 Oct 2. doi:10.1038/s41420-021-00667-x(IF:5.241)
[19] Wu D, Lv J, Zhao R, et al. PSCA is a target of chimeric antigen receptor T cells in gastric cancer. Biomark Res. 2020;8:3. Published 2020 Jan 28. doi:10.1186/s40364-020-0183-x(IF:4.866)
[20] Qiao K, Chen C, Liu H, Qin Y, Liu H. Pinin Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition in Hepatocellular Carcinoma by Regulating m6A Modification. J Oncol. 2021;2021:7529164. Published 2021 Dec 7. doi:10.1155/2021/7529164(IF:4.375)
[21] Li K, Liu T, Chen J, Ni H, Li W. Survivin in breast cancer-derived exosomes activates fibroblasts by up-regulating SOD1, whose feedback promotes cancer proliferation and metastasis. J Biol Chem. 2020;295(40):13737-13752. doi:10.1074/jbc.RA120.013805(IF:4.238)
[22] Kong Y, Feng Z, Chen A, et al. The Natural Flavonoid Galangin Elicits Apoptosis, Pyroptosis, and Autophagy in Glioblastoma. Front Oncol. 2019;9:942. Published 2019 Sep 27. doi:10.3389/fonc.2019.00942(IF:4.137)
[23] Kong Y, Feng Z, Chen A, et al. The Natural Flavonoid Galangin Elicits Apoptosis, Pyroptosis, and Autophagy in Glioblastoma. Front Oncol. 2019;9:942. Published 2019 Sep 27. doi:10.3389/fonc.2019.00942(IF:4.137)
[24] Hu J, Wang Y, Yuan Y. Inhibitors of APE1 redox function effectively inhibit γ-herpesvirus replication in vitro and in vivo. Antiviral Res. 2021;185:104985. doi:10.1016/j.antiviral.2020.104985(IF:4.101)
[25] Li Q, Wei D, Feng F, et al. α2,6-linked sialic acid serves as a high-affinity receptor for cancer oncolytic virotherapy with Newcastle disease virus. J Cancer Res Clin Oncol. 2017;143(11):2171-2181. doi:10.1007/s00432-017-2470-y(IF:3.503)
[26] Han B, Jiang P, Liu W, et al. Role of Daucosterol Linoleate on Breast Cancer: Studies on Apoptosis and Metastasis. J Agric Food Chem. 2018;66(24):6031-6041. doi:10.1021/acs.jafc.8b01387(IF:3.412)
[27] Hu H, Zhang Z, Wang R, et al. BGC823 Cell Line with the Stable Expression of iRFP720 Retains Its Primary Properties with Promising Fluorescence Imaging Ability. DNA Cell Biol. 2020;39(5):900-908. doi:10.1089/dna.2019.5057(IF:3.314)
[28] Ni XR, Zhao YY, Cai HP, et al. Transferrin receptor 1 targeted optical imaging for identifying glioma margin in mouse models. J Neurooncol. 2020;148(2):245-258. doi:10.1007/s11060-020-03527-3(IF:3.267)
[29] Feng H, Tang J, Zhang P, Miao Y, Wu T, Cheng Z. Anti-adipogenic 18,19-seco-ursane stereoisomers and oleane-type saponins from Ilex cornuta leaves. Phytochemistry. 2020;175:112363. doi:10.1016/j.phytochem.2020.112363(IF:3.044)
[30] Zhao Y, Li T, Tian S, et al. Effective Inhibition of MYC-Amplified Group 3 Medulloblastoma Through Targeting EIF4A1. Cancer Manag Res. 2020;12:12473-12485. Published 2020 Dec 3. doi:10.2147/CMAR.S278844(IF:2.886)
